从植物中提取纯DNA的经验是什么?

时间:2019-03-25 09:46:58 来源:芙蓉洞农业网 作者:匿名



如何有效地提取完整和纯DNA用于后续研究是生物技术工作者关注的问题。

众所周知,DNA主要存在于细胞核中。

以植物为例,为了获得纯DNA,必须首先分解植物细胞,许多富含次生代谢物的植物细胞如多酚和多糖在破碎后容易被氧化。褐变和与DNA的粘附使得从这些植物中提取具有良好完整性和纯度的基因组DNA极其困难。

这就像从一个新鲜的鸡蛋中获取纯蛋黄。蛋壳相当于植物细胞的细胞壁,蛋黄相当于植物细胞的细胞核。在提取过程中,蛋壳首先被破坏。一旦蛋壳破裂,蛋中的蛋清就会被释放,这不利于获得蛋黄。

该技术的不成熟严重制约了植物遗传多样性检测和基因型鉴定的后续研究。因此,开发从多酚中提取和纯化基因组DNA的方法尤为重要。

国家科技支撑计划GB/T30988-2014由中国检测技术研究院生物研究所承担,重点是通过从多酚中提取,纯化和检测基因组DNA来解决这一问题。

研究方法

目前,常规基因组DNA提取方法通常使用手动研磨来破坏植物细胞。

研磨方法耗时长,效率低,难以控制温度和电池破损。多酚在研磨过程中容易被氧化;提取的基因组DNA不完整,质量稳定性和重复性差。

该项目的研究方法首先对细胞破碎方法进行了改进,并用冷冻研磨机对其进行机械研磨,以确保细胞在低温环境下快速均匀地破碎,细胞破碎后易氧化和褐变的关键是解决了。困难。

同时,向提取物中加入β-巯基乙醇等抗氧化剂可以进一步防止多酚化合物的氧化,并且在反复纯化后,可以有效地除去多酚,多糖,蛋白质等杂质。

研究成果国家标准

结果表明,提取的基因组DNA具有良好的完整性和高纯度,能够进行酶消化和聚合酶链反应(PCR)。该方法经过系统研究,表明该提取方法稳定,可靠,重复性好。经国家标准化管理委员会批准为国家标准(GB30988-2014《多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法》),大大提高了该方法的适用性,为后续遗传多样性检测,基因定位,基因型鉴定等相关研究工作奠定了基础。方面。基础。

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